MP Bio G418 geneticin遺傳霉素

簡(jiǎn)單介紹：G418是一種對(duì)原核及真核細(xì)胞都具毒性的氨基糖苷類抗生素,它具有干擾蛋白合成的功能，可用來(lái)篩選表達(dá)G-418抗性基因(如:氨基糖苷3'磷酸轉(zhuǎn)移酶[APH 3'])的培養(yǎng)細(xì)胞, 在分子遺傳試驗(yàn)中常被用作抗性篩選。它通過(guò)抑制轉(zhuǎn)座子Tn601，Tn5的基因?qū)υ撕驼婧说燃?xì)胞產(chǎn)生毒素,包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞,也包括原生動(dòng)物和蠕蟲(chóng)。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞DNA后 ,則能啟動(dòng)neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物的高效表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面得以廣泛應(yīng)用。

G418 Sulfate（G418liu酸鹽），也稱作Geneticin（遺傳霉素），是一種結(jié)構(gòu)類似于*B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素，通過(guò)影響80S核糖體功能和阻斷延伸步驟來(lái)干擾蛋白合成，對(duì)原核和真核等細(xì)胞都有毒性 ,包括細(xì)菌、酵母、高等植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞 ,也包括原生動(dòng)物和蠕蟲(chóng)。其抗性基因（主要為neo基因）位于轉(zhuǎn)座子Tn601（903）或Tn5（來(lái)源于細(xì)菌），但是可以在真核細(xì)胞中表達(dá)。通過(guò)基因重組技術(shù)將這些抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對(duì)G418的耐藥性，從而用來(lái)篩選和維持培養(yǎng)攜帶抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。

MP Bio G418 geneticin遺傳霉素

哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，當(dāng)抗性基因neo被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組后 ,使其編碼表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3)II）。此酶通過(guò)共價(jià)修飾G418的氨基或羥基功能，抑制抗生素-核糖體間的相互作用，從而使得抗生素失活。這一特性賦予細(xì)胞產(chǎn)生抗性。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選實(shí)驗(yàn)，需要建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）確定殺死無(wú)抗性細(xì)胞的zui低有效濃度。

植物細(xì)胞中，通過(guò)轉(zhuǎn)染攜帶nptII基因的抗性質(zhì)粒孵育其抗性。nptII基因也能編碼表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，這個(gè)酶使得多種抗生素喪失活性，包括G418，*和*。

使用方法

1.       G418儲(chǔ)存液的配制（50mg/ml，活性濃度）

1. 活力單位的換算

根據(jù)此公式進(jìn)行換算：（1000/A₀）×A₁=A₂，其中A₀是G418的活力值（Potency），因批次而異?？梢?jiàn)批次對(duì)應(yīng)的質(zhì)檢報(bào)告，或者瓶子上的標(biāo)簽。A₁是想配制的活性G418濃度。A₂是實(shí)際稱重的粉末與體積比濃度。

比如若所用批次的G418 活力值為：750 µg/mg，要配制50mg/ml的G418活性濃度，則實(shí)際要配制的粉末濃度為1000/750×50 mg/ml=66.33 mg/ml。

如果配制10ml的G418儲(chǔ)存液（活性濃度，50 mg/ml），則需要稱取663.3mg粉末。

1. 除菌和保存

根據(jù)上述換算得到的實(shí)際粉末稱重量，加入10 ml無(wú)菌去離子水內(nèi)使其*溶解。

先用5ml無(wú)菌去離子水預(yù)濕潤(rùn)0.22μm針頭式過(guò)濾器，除盡水。之后使用此濾器過(guò)濾，除菌后分裝成單次使用的小量（如1ml）放到-20℃凍存，1年穩(wěn)定。