Biolistic PDS–1000/He 基因槍系統(tǒng)主單元。主轉(zhuǎn)化室(右)包括微粒發(fā)射裝配和轟擊氦壓力計(上)。中央測量計(左)監(jiān)控轉(zhuǎn)化室內(nèi)的真空狀態(tài),下面兩個旋鈕用于調(diào)節(jié)真空流和排氣速率。
Biolistic PDS–1000/He 基因槍系統(tǒng)將微米大小的、包被有核酸的金或鎢微粒加速到所需要的速度,從而將基因?qū)爰毎⒔M織或器官。這一過程既不依賴也不作用于細胞表面。系統(tǒng)利用高壓氦氣的轟擊,來推動攜帶有微粒的塑料大顆粒載體盤朝目標細胞方向加速。推進大顆粒載體的氦氣壓力由所使用的不同破裂盤決定。破裂盤是一種可在特定壓力下破裂的塑料密封體。終止屏可阻止大顆粒載體,使微粒可以通過和轉(zhuǎn)染靶細胞。為了提高這一進程的效率,可抽空轉(zhuǎn)化室,使壓力低于大氣壓力,從而當微粒打向靶細胞時可減少其摩擦阻力。
Biolistic PDS–1000/He 系統(tǒng)能提供:
- 一種可重復(fù)的、轉(zhuǎn)化完整培養(yǎng)細胞的方法,幾乎無需對細胞進行處理
- 用其它方法不能完成的,有特殊生長需要的細胞轉(zhuǎn)化
- 實驗過程的zui大控制
- 高重復(fù)性
轟擊參數(shù)*
細胞類型 | 真空 (inches Hg) | 目標間距 (cm) | 氦氣壓力 (psi) | 顆粒大小 |
細菌 | 29 | 6 | 1,100 | M5 鎢 |
酵母菌 | 28 | 6 | 1,300 | 0.6 µm 金 |
藻類 | 29 | 6 | 1,300 | 0.6 µm 金 |
植物 | ||||
胚芽 | 28 | 6 | 1,300 | 1.0 µm 金 |
愈傷組織或愈傷組織或 | 28 | 9 | 1,100 | 1.0 µm 金 |
細胞器 | 28 | 6 | 1,300 | 0.6 µm 金 |
動物 | ||||
組織培養(yǎng) | 15 | 3 | 1,100 | 1.6 µm 金 |
組織切片 | 25 | 9 | 1,100 | 1.6 µm 金 |
* 我們推薦這些設(shè)定作為多種細胞類型的起始轟擊參數(shù)。許多因素會影響轟擊效率,但對于多數(shù)用戶來說,分別優(yōu)化主要變量再小幅調(diào)整以測試它們的相互影響,就足以獲得滿意的結(jié)果。
PDS–1000/He Hepta 適配器
PDS–1000/He 基因槍系統(tǒng)加上Hepta 適配器后,可以比標準系統(tǒng)多轉(zhuǎn)化7–10 倍的細胞。它配接PDS– 1000/He 系統(tǒng)的沖擊室,將氦氣沖擊波分導(dǎo)至7 個大顆粒載體處。這樣,通過在更大面積上均一地分散DNA 包被的金粉或鎢粉,增加了這個系統(tǒng)一次轟擊的細胞數(shù)。當氦氣被分成7 道時,降低了壓力和顆粒速度,該系統(tǒng)特別適合不太需要強大穿透力的植物和培養(yǎng)細胞。