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Gey's紅細胞裂解液(Gey's Lysis Buffer)使用說明書 

【產品組成】

【保存條件】

 4℃,1個月

【產品概述】

  在生物科研領域，經常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Gey's Lysis Buffer是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，主要由磷酸鹽、葡萄糖、NH₄Cl等組成。

  Gey's Lysis Buffer經過優化配方，含碳酸鹽、Ca²⁺、Mg²⁺，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。本裂解液經高壓滅菌及過濾除菌，經過Gey's Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續的細胞培養、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測，尤其適用于去除皮細胞脾細胞中的紅細胞。

【使用方法】

(一)組織細胞樣本

1、制備細胞懸液:新鮮組織經過*或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解:加入5倍細胞沉淀體積的Gey'sLysisBuffer，輕柔吹打混勻，立即冰浴裂解5min。

3、加入*FCS，4℃300g離心10min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。

5、洗滌：根據實驗要求加入適量HBSS，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作，所加入HBSS的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。

6、如有必要，重復上述步驟5一次，共洗滌1～2次。

7、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

(二)血液樣本

1、取新鮮抗凝血，400～500g離心5min，棄上清。

2、裂解:加入6～10倍細胞沉淀體積的Gey's Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，立即冰浴裂解5min。本(特別提醒：對于鼠的血液，裂解5min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至5～10min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)

3、加入*FCS，4℃300g離心10～15min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。

5、洗滌:根據實驗要求加入適量HBSS，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作，所加入HBSS的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。

6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液體積的Gey's Lysis Buffer進行第2步操作，并在4℃裂解10～15min。對于鼠的血液，裂解15min已經足夠；對于人的外周血，宜延長裂解時間至20min，但通常不宜超過20min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

【注意事項】

1、制備細胞懸液時應根據實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。

2、后續試驗如果是用于細胞培養，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內操作。

3、離心步驟盡量在4℃離心機上操作。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞丌會影響后續的檢測。

6、如果經過Gey's Lysis Buffer處理后的樣品后續用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。