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方法編號(hào)：5022

1 適用范圍：適用于各類食品、原料和純凈水等樣品中大腸菌群的快速測(cè)定。

2 方法原理：將乳糖、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長(zhǎng)并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽(yáng)性，記錄每個(gè)稀釋度大腸菌群陽(yáng)性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。

3方法特點(diǎn)：與國(guó)標(biāo)法中的九管法相對(duì)應(yīng)，將原來(lái)幾步的試驗(yàn)簡(jiǎn)化為一步，時(shí)間由78h縮短為24h以內(nèi)，省去了制備培養(yǎng)基、消毒和培養(yǎng)器皿的清洗處理等大量輔助性工作，隨時(shí)可以打開包裝進(jìn)行抽樣檢測(cè)。

4 操作方法

4.1樣品處理：無(wú)菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯中，經(jīng)充分振搖做成1：10的樣品勻液，用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管制成1：100的稀釋液。以此類推，每個(gè)稀釋度更換一支滅菌吸管。

4.2接種：選取兩個(gè)稀釋度進(jìn)行接種，普通食品一般采用1：10和1：100這兩個(gè)稀釋度，飲料和飲用水采用原液和1：10兩個(gè)稀釋度。每份由三片大紙片（接10mL）,六片小紙片（接1mL）組成,大片每小袋二張疊放算作一片。用滅菌吸管吸取10 mL 1：10稀釋液加到含有大紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品1g），吸透后平放，做三個(gè)重復(fù)。再用1mL滅菌吸管吸取1 mL同一稀釋液涂布到含有小紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品0.1g），做三個(gè)重復(fù)。再取一支1 mL滅菌吸管吸取1 mL 1：100稀釋液涂布到含有小紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品0.01g），做三個(gè)重復(fù)。

4.3 培養(yǎng)：將接種好的紙片（可疊放）放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15h～24h。

5結(jié)果判斷與計(jì)數(shù)：若紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為大腸菌群陽(yáng)性紙片。紙片保持紫蘭色不變或在紫蘭色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，但周圍沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。記錄每個(gè)稀釋度大腸菌群陽(yáng)性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。如接種的*個(gè)稀釋度的稀釋液為原液，應(yīng)將表上查出的結(jié)果除以10，以此類推。

6注意事項(xiàng)：如果樣品的酸堿度在pH7以下，應(yīng)先用滅菌1mol/L氫氧化鈉（NaOH）調(diào)節(jié)溶液調(diào)至中性，避免因pH的原因?qū)е碌募埰凕S而影響結(jié)果觀察。

方法注解

1 檢測(cè)意義：大腸菌群是評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，目前已被廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。大腸菌群多存在于溫血?jiǎng)游锛S便、人類經(jīng)常活動(dòng)的場(chǎng)所以及有糞便污染的地方，大腸菌群數(shù)的高低，表明了食品及食品生產(chǎn)過程中受糞便污染的程度。大腸菌群計(jì)數(shù)紙片方法與傳統(tǒng)方法相比，節(jié)省了許多時(shí)間，省去了大量輔助性工作。

2 編寫說(shuō)明

2.1目前，國(guó)外某一企業(yè)出品的大腸菌群計(jì)數(shù)紙片的檢測(cè)結(jié)果已與平板培養(yǎng)法相當(dāng)，但產(chǎn)品售價(jià)相對(duì)較高。國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的此類產(chǎn)品在2007年經(jīng)山東省疾病預(yù)防控制中心微生物所驗(yàn)證時(shí)，如廣州天河綠洲生化研究中心的產(chǎn)品與平板法檢測(cè)結(jié)果的比率大約在90％左右，將其用于樣品中不得檢出大腸菌群的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)是可行的。在對(duì)樣品要求大腸菌群以cfu/mL.g（菌落形成單位）表述時(shí)，可參照菌落計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行。

2.2在一些實(shí)驗(yàn)室中，使用國(guó)產(chǎn)大腸菌群檢測(cè)試劑盒的方法。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所對(duì)天津諾凡公司出品的試劑盒與國(guó)標(biāo)法進(jìn)行了50份樣品的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)為r=0.992,p=0.000。兩種方法雖然都需要48h出結(jié)果，但試劑盒法具有易操作、省物力的優(yōu)點(diǎn)。

3 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法檢索

1. GB 4789.3—2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-食品微生物學(xué)檢驗(yàn)-大腸菌群計(jì)數(shù)